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流式细胞检测-北京博奥森生物手艺无限公司
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流式细胞检测
颁发者:北京博奥森生物      颁发时候:2020-5-28

流式检测平台先容
Bioss在原本的流式细胞仪BD FACSCalibur根本上引进新一代智能化特性化-ACEA NovoCyte系列流式细胞仪。此流式细胞仪已取得医疗东西注册证,可普遍利用于科研及临床范畴。配有三激光器(405nm,488nm,640nm), 13个荧光检测通道,可同时实现13个目标检测的多色阐发。阐发软件可供给客户30天阐发试用权,具备高效的数据收罗、阐发和报告功效、矫捷的在线离线弥补功效,能够知足研讨职员针对各类范例的细胞或生物颗粒的多色阐发等尝试需要。


一、检测办事内容

本办事名目首要是利用流式细胞仪对客户供给的细胞样品或全血样品停止检测阐发。首要检测内容有:细胞抗原判定、细胞分型及判定、细胞凋亡检测、细胞周期阐发、JC-1等。


二、办事流程 

1

客户提交换式细胞检测请求与尝试请求,与公司约定具体的尝试名目、数目和用度,两边签定《拜托流式细胞检测办事条约书》;

2

客户供给检测样品,我公司按照协议请求支配检测名目预尝试,两边按照预尝试成果约定尝试手艺参数细节;

3

公司尝试室正式展开检测尝试,在划定时候外向客户提交尝试数据和检测报告。


三、样品请求

 客户供给信息:1.供给抗体货号及厂家  2.细胞信息  3.尝试计划及具体请求

 样品寄送须知:细胞常温, 发展杰出,无净化,细胞数目>106个;构造离体后制成单细胞悬液,插手PBS/培育基内4℃运输;血液收罗在EDTA/肝素钠的采血管内混匀,4℃运输。

四、托付规范

 上机原始数据,高清散点图直方图密度图等数据阐发图片,具体检测报告。

     

      更多概况请见官网:1stopmortgageshop.com



尝试数据分享

细胞抗原判定

尝试道理:按照抗原-抗体反映道理,检测细胞外表或胞内抗原,对统一样品检测差别种抗原,能够分为单标、双标和多标。尝试流程:离心去上清-调剂细胞密度-牢固穿膜-插手标记抗体-孵育-离心去上清-重悬细胞-上机检测。

尝试成果展现:


单染直方图

单染散点图

双染散点图


细胞凋亡检测

尝试道理:Annexin V挑选性连系磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称PS),是一种份子量为35-36kD的Ca2+依靠性磷脂连系卵白,能与细胞凋亡进程中翻转到膜外的PS高亲和力特同性连系。在一般细胞中, PS只散布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡初期,细胞膜中的PS由脂膜内侧翻向外侧。利用带有绿色荧光FITC标记的Annexin V,即Annexin V-FITC,则可经由过程流式细胞仪或荧鲜明微镜间接检测到PS外翻这一细胞凋亡的主要特点。此体例被公以为检测细胞初期凋亡的活络目标之一。尝试流程:细胞培育-转染或药物处置-细胞搜集- Annexin V-FITC/PI标记-上机检测。尝试成果展现:

左下象限LL为活细胞;右下象限LR为初期凋亡细胞右上象限UR为初期凋亡细胞;左上象限UL为碎片及坏死细胞。


Annexin V-FITC(绿色)染色细胞为初期凋亡细胞;PI(白色)染色细胞为坏死细胞;Annexin V-FITC/PI双染细胞为晚凋或坏死细胞


细胞周期检测

尝试道理:碘化丙啶(Propidium,简称PI)是一种双链DNA 的荧光染料,PI和双链DNA 连系后能够发生荧光,并且荧光强度和双链DNA 的含量成反比。细胞内的DNA 被PI染色后,可利用流式细胞仪对细胞停止DNA 含量测定,而后按照DNA 含量的散布环境停止细胞周期阐发。尝试流程:细胞培育-转染或药物处置-细胞搜集-细胞周期试剂盒-上机检测。尝试成果展现:


细胞周期拟合图


线粒体膜电位检测-JC-1

尝试道理:线粒体膜电位的降落是细胞凋亡初期的一个标记性事务。JC-1是一种抱负的用于检测线粒体膜电位的荧光探针,能够检测细胞、构造或纯化的线粒体膜电位。其道理是,当线粒体膜电位较高时,JC-1堆积在线粒体基质中,构成聚合物,488nm激起时的最大发射波长为590nm,能够发生白色荧光,在流式上表现为FL1和FL2双阳性;当线粒体膜电位较低时,JC-1不能堆积在线粒体基质中,此时JC-1为单体,488nm激起时最大发射波长为527nm,能够发生绿色荧光,构成流式图汇总一切细胞FL1为阳性。凋亡细胞则大多为FL1单阳性。差别荧光色彩的改变反映线粒体膜电位的变更,经常利用红绿荧光的绝对比例权衡线粒体去极化的比例。尝试流程:细胞离心去上清-调剂细胞密度-装载探针-孵育探针-上机检测。
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